免加热免逆转录：指数滚环扩增把病毒RNA检测直接搬上试纸条

McMaster大学团队在Angew. Chem. Int. Ed.发表新作：RNase I切RNA引物 + 指数滚环扩增（E-RCA）+ 链置换（TMSD）三段式接力，把结构化病毒RNA直接变成试纸条上的肉眼可见信号。LOD低至500 aM，唾液45分钟出结果，灵敏度95%–100%、特异性100%。

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三个数字

500 aM

检测限。aM 级，相当于每毫升几十个拷贝的量级。30分钟等温反应，不需要任何热循环。

45 min

唾液取样到试纸条读结果的全流程时间为45 min，无须加热，全程室温。

95%–100% / 100%

对40例临床唾液样本（20例阳性，20阴性）的四个基因组区域验证，灵敏度达到95%–100%，特异性100%，AUC全部1.00。

RCA

滚环扩增（RCA）本来是最适合常温的那一个，Φ29聚合酶室温就能跑，产物是长单链串联体。但它有个致命伤，产物太长，在试纸条的NC膜上泳动效果不佳。

该研究团队使用独特的设计解决了这个问题。

RNase I把基因组RNA随机切碎，唯独与环状DNA模板结合的目标区段被保护下来，直接充当第一代引物P1，RNA二级结构问题也顺手解决。

加一条30 nt的第二代引物P2，结合到RCA长产物上被Φ29延伸、置换出83 nt的重复单元P2EP。P2EP再咬住自带8–10 bp自互补区的环状模板，被Φ29的3’–5’外切活性修掉3’悬垂，变成第三代引物P3，这样，P3和P1一样能启动新一轮RCA，线性RCA就此变指数。

toehold介导的链置换反应把RCA大产物变成短的桥接DNA，释放出的B-DNA在试纸条检测线显色。大分子过不了膜的问题被成功绕开，不用酶切、不用标记。 fig

临床表现

40例经RT-qPCR检测已确认分类的唾液样本，覆盖四种病毒RNA区域（NSP12、NSP13、NSP14、NSP8），三个系统灵敏度95%–100%、特异性100%，ROC曲线AUC=1.00。而市售BTNX新冠抗原检测试剂测同一批未处理唾液，10个阳性里只抓到2个。

不加热、不提取、不逆转录、不配PCR仪，试纸条肉眼读数。

Amal Mathai, Monsur Ali, Yingfu Li, John D. Brennan. Coupling Exponential Rolling Circle Amplification to Lateral Flow Devices for Point-of-Care Detection of Viral RNA. *Angewandte Chemie International Edition*. 2026; e3766984. DOI: 10.1002/anie.3766984

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