40倍亲和力！兔单抗把鼠单抗按在地上摩擦！
同一靶点，40 倍亲和力碾压，只是用了兔单抗。
中国农业大学王战辉研究团队在 Analytical Chemistry 发表封面文章，使用单细胞分选技术，从兔脾脏里选出 5 株抗氟苯尼考（FF）及其代谢物氟苯尼考胺（FFA）的兔单抗，其中 RmAb-A4# 对 FF、FFA 的 IC50 分别只有 0.07 ng/mL 和 0.16 ng/mL，比之前最好的鼠单抗 4F8 高出 40 倍和 20 倍，比文献报道过的所有抗体（含兔多抗）高 2-463 倍。
为什么？
兔的抗体库天然比小鼠类大，其脾脏淋巴细胞库大约大 50 倍，半抗原这种小分子也能覆盖到更多表位。更关键的是，兔抗体轻链多出一对 Cys80-Cys172 二硫键，可变区 CDRL3 平均更长（本文中兔单抗 13 个氨基酸 vs 小鼠 9 个），结合域的“口袋”更开放。
怎么筛出来的？
团队用的 CSMN 平台，使用40 万个纳米孔，把兔脾淋巴细胞做单细胞悬浮后，使理论上每个纳米孔仅有一个细胞，使用Cy3 荧光实时追踪抗体的分泌情况，经过约8 小时连续成像，阳性孔从第 2 小时开始出现荧光信号。结果显示，两只兔子分别只有 33 和 21 个孔出现荧光信号。
通过对阳性单细胞的基因进行重组表达，得到 5 株功能性兔单抗，成功率 16.7%，较传统杂交瘤平台兔单抗的阳性率 1.9% 还是要高不少。
分子机制
通过分子对接和动力学模拟对其分子机制给了解释。兔单抗RmAb-A4# 的 Fab 上有 6 个二硫键（小鼠 4 个），对 FF/FFA 形成 3-4 个氢键+卤键+π-π 堆积；结合自由能 ΔG −22.01/−18.81 kcal/mol，而小鼠单抗只有 −2.17/−8.75，两者相差一个数量级。
抗体的稳定性表现也非常优秀，在18-5000 mM的NaCl范围内，其 IC50 稳在 0.07-0.19 ng/mL；在pH 4-9 的环境中，依旧能保持活性；甲醇浓度 <15%、乙腈 浓度<5% 的条件下，仍不受干扰。
试纸条测试
团队基于 RmAb-A4# 的金标试纸条进行性能评估，在牛奶基质下，无前处理，FF/FFA 目视检出限分别为 0.5/0.7 μg/L，半定量 LoD为 0.22/0.17 μg/L；在鸡蛋基质，做 3 倍稀释下，半定量LoD分别达到 0.74/0.78 μg/kg。回收率达到 80-110%，检测全程耗时不到 10 分钟。
40倍亲和力，心动不如行动！
文献信息：Li P, Pan Y, Li Y, et al. Single-Cell-Derived Rabbit mAb-Based Immunoassay for Simultaneous Detection of Florfenicol and Florfenicol Amine. *Anal. Chem.* 2026, 98(29): 21280-21291. DOI: 10.1021/acs.analchem.6c01192
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