竞争法免疫侧向层析十年综述，一本小分子检测的设计圣经
Pedreira-Rincón J et al. *Lab Chip*. 2025;25(11):2578-2608. DOI: https://doi.org/10.1039/D4LC01075B
竞争法的逻辑跟夹心法（sandwich assay）是反的——T线消失 = 阳性，两根线都出来 = 阴性。这个反直觉的信号输出是新入门研发人员踩过的第一个坑，也是终端用户最大的困惑来源。
这篇发表在Lab Chip上的综述把竞争型LFA从理论模型到用户体验，几乎完全覆盖。
三种竞争格式，各有各的作用
综述把竞争型LFA分成三类：
直接竞争——靶物质的天然或重组抗原作为竞争抗原标记在探针上，和样品中的靶物质抢结合位。T线信号越弱，靶物质越多。这是最经典的方式。
间接竞争——抗原固定在膜上做T线，样品中的靶物质与标记抗体结合后流过T线，靶标越多，被T线截留的抗体越少，信号越弱。
非标准方式——包括反向信号、双竞争夹心等，适用于特殊场景（如超小分子、双表位靶标，比较少见）。
理论建模
综述用一整章讲建模，建模分两条路：
- **解析模型**：用方程描述系统。最早可追溯到 Qian & Bau 在2000年代初建立的平衡态模型。Sotnikov 团队后来做了改进，考虑了LFA的非平衡特性。
- **数值模型**：步进式计算，能纳入更多参数（流速、多价结合、纳米颗粒负载量等，更贴近实验常规。
先跑模型找到最优参数窗口，再进实验验证，能省不少时间。
T线上的关键分子
竞争抗原的选择直接决定方法开发的成败。
- 直接竞争的方式中，竞争抗原的使用浓度跨度**从5 μg/mL到3000 μg/mL**，跨度600倍，这取决于亲和力和灵敏度需求。
- 间接竞争方式中，竞争抗原分子量从**288 Da（DHEA，脱氢表雄酮）到67 kDa（HSA，人血清白蛋白）**，大多数需要载体蛋白（BSA最常见）来增强稳定性或增强表面原性。
- 非标准方式的竞争者设计更灵活，但更复杂性。
多重竞争
综述识别出17篇多重竞争型LFA论文。主要发现：
- **间接竞争方式**最常用，主要做双靶标检测；
- 5篇做了2个以上靶标的多重检测；
- **应用领域高度集中在食品安全**——毒素和抗生素残留，少数扩展到药物滥用监测、健康标志物、镰状细胞病诊断；
多重检测的核心挑战在于交叉反应的控制，解决策略通常包括抗体工程、计算建模预测交叉反应、自组装受体等。
用户体验
这篇综述的独特之处在于花了专门的篇幅来讲用户视角和用户体验。
竞争型LFA两根线 = 阴性，一根线 = 阳，非专业人员看到两根线会本能以为是”阳性”。弱线判读难度大，夹心法里只要线出现就是阳性，竞争法里要看的是线”有多淡”，人眼很难准确判断清晰。
ESI：一张十年的参数总表
ESI（Supporting Information）把所有已大部分之前发表的竞争型LFA关键参数汇成一张大表，含靶标、受体亲和力、竞争抗原设计、标记物、膜材料、LoD、样本基质等。做新产品调研时，查这张表比你从头搜文献快多啦。
做小分子快检试纸条还没被裁的研发工程师快学起来！
Pedreira-Rincón J et al. *Lab Chip*. 2025;25(11):2578-2608. DOI: https://doi.org/10.1039/D4LC01075B